Yeast one-hybrid assay

 
一、技术介绍
真核生物基因的转录起始需转录因子参与，转录因子通常由DNA结合结构域(DNA_ binding domain,BD)和转录激活结构域(activation domain,AD)。用于酵母单杂交系统的酵母GAL4蛋白是一种典型的转录因子，GAL4的DNA结结构域靠近羧基端，含有几个锌指结构，可激活酵母半乳糖苷酶的上游激活位点(UAS)，而转录激活结构域可与RNA聚合酶或转录因子TFD相互作用，提高RNA聚合酶的活性。在这一过程中，DNA结合结构域和转录激活结构域可完全独立地发挥作用。在GAL4系统中构建与基因的ORFs融合的激活结构域GAL4-AD的特异载体，顺式作用元件与GAL4的DNA结合结构域GAL4-BD融合构建载体，分别转化酵母细胞。在酵母内表达的蛋白若与顺式作用元件发生相互作用时，就会将GAL4-BD和GAL4-AD结合在一起，从而与上游激活序列( upstream activatingsequence,UAS)结合，激活相应报告基因的表达，在相应的营养缺陷型培养基上筛选阳性。
 
酵母单杂交系统应用：
（1）进一步鉴定已知或预测DNA-蛋白质之间是否存在相互作用；
（2）筛选结合于目的顺式调控元件或其他短DNA结合位点的新蛋白；
（3）定位已经证实的具有相互作用的DNA结合蛋白的DNA结合结构域；
（4）准确定位与DNA结合的核苷酸序列。
 
二、服务内容
（1）酵母单杂交载体构建；
（2）DNA 诱饵序列自激活检测和3-AT抑制浓度筛选；
（3）酵母单杂交点对点检测。
 
三、客户提供样本
  目的基因序列或质粒模板。
 
四、交付结果
完整的实验报告，包括实验数据，平板图片，结果分析等。
 
五、结果展示
（1）DNA 诱饵序列自激活检测和3-AT抑制浓度筛选；
（2）酵母单杂交点对点检测，含阴性对照组、阳性对照组和实验组平行结果。
 

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